高效液相色谱仪流动相有两个作用，一是携带样品前进，二是给样品提供一个分配相，调节选择性，以达到样品的满意分离。流动相对样品的分离影响很大，通常是一些有机溶剂、水溶液和缓冲溶液等。 高效液相色谱仪流动相选择应考虑与检测器相适应、与色谱系统相适应、流动相粘度和溶剂纯度等因素。 一、与检测器相适应： 1、紫外吸收检测器：流动相应在所使用波长下没有紫外吸收或吸收很小。 2、示差折光检测器：应选择折光指数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 二、与色谱系统相适应： 在液固吸附色谱仪中，吸附剂往往不是酸性的就是碱性的，所选流动相和固定相之间应没有不可逆的化学吸附。例如在氨基键合相柱上应避免使用含羰基（如丙酮）的流动相，否则分子间较强的作用会使固定相变质，甚至失效。 高效液相色谱仪的输液系统大多是不锈钢材质，最好使用不含氯离子的流动相。当使用多孔镍过滤板时，应避免使用较大酸度的流动相。 三、流动相粘度： 流动相的溶剂粘度应＜2 mPa•s。流动相粘度大，液相传质慢，柱效低。流动相粘度增加一倍，柱压降也相应增加一倍，过高的柱压降给仪器和操作都会带来麻烦。 四、溶剂纯度：