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- 冷冻保存哺乳动物细胞在生物学研究中非常有价值和普遍。为了防止技术原因(培养操作)使细胞污染或物理原因(培养箱故障)使长期培养功亏一篑。此外,长期多次的培养和传代,导致细胞在遗传学性状上的老化和分化都是促使在接收或生成新细胞系后首要考虑的适宜策略就是冻存细胞。低温冻存对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于*停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0℃到-20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,冰晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。
如何减少或者避免冰晶形成,如同冻存细菌时用的甘油,DMSO(二甲基亚砜)是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。冻存液中加入后可以使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内的水分逐渐透出,从而减少了冰晶的形成,从而避免细胞的损伤。这就是为什么低温冻存细胞时为什么要采用慢冻的一个重要原因。
一旦从生长培养基转移到冷冻培养基中,就要执行慢冻的过程。尽管冷冻细胞系是通常执行的程序,但是当没有合适的冷冻器具时,或者由于存在血清,额外洗涤或操作不当时,就会出现问题。当然,这个问题是在细胞复苏(快融)后才发现的。发现复苏后的细胞大部分或者全部都是死细胞,甚至还有不容易发现的整个冻存过程的不当导致的细胞分化。所有这些问题和担忧,都可以通过BambankerTM细胞冷冻培养基试剂家族来解决。BambankerTM*的成分允许直接将细胞在-80°C或液氮中冷冻保存,从而避免了对额外设备的需求,并且也避免了耗时且复杂的梯度逐渐冷冻方案。
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