Roche LightCycler480 II荧光定量PCR仪是一款广泛应用于基因表达分析、突变检测、病原检测等领域的设备。其主要结构和工作原理如下：
主要结构
1.光学系统：LightCycler480 II配备了高灵敏度的荧光检测系统，包含多个激光光源和光电倍增管（PMT）。系统通过激光激发不同波长的荧光染料，结合滤光片选择特定的波长范围，从而检测PCR反应中的荧光信号。
2.热循环模块：仪器内部具有精确的热循环模块，负责控制温度的变化。该模块能够快速地升降温度，确保每个PCR周期中的变性、退火和延伸步骤的高效完成。通常，LightCycler480 II使用的是Peltier热电器件，以实现快速且均匀的温控。
3.样本管与多孔板：PCR反应液被装载在96孔或384孔的PCR板中。LightCycler480 II具有高通量的样本处理能力，可以同时处理大量样本，减少分析时间。
4.计算机与软件系统：仪器配备有强大的数据采集与分析软件，如LightCycler 480软件。它不仅负责监控实时PCR过程中的荧光数据，还能够进行数据分析、结果报告生成及实验设定等。
工作原理
1.荧光定量PCR：Roche LightCycler480 II的工作原理基于实时荧光定量PCR技术。与传统的PCR相比，实时荧光PCR在每个扩增周期中实时监测荧光信号的变化。其通过荧光染料（如SYBR Green或TaqMan探针）结合到PCR产物中，随着PCR反应的进行，产物逐渐增加，荧光信号也随之增强。
2.荧光信号检测：当荧光染料与PCR产物结合时，激光光源会激发荧光分子发射荧光，经过滤光片后，由光电倍增管（PMT）捕捉到荧光信号。这些信号被转化为数字数据，表示各个时间点上PCR产物的数量。
3.数据分析：荧光信号的累积与PCR产物的扩增成正比。在反应的早期阶段，荧光信号较弱，随着扩增产物的积累，荧光信号会达到一个阈值（CT值）。通过监测该阈值的到达时间，仪器可以计算出初始模板的数量。
4.定量分析：通过与标准曲线对比，LightCycler480 II可以准确计算出样本中靶基因的相对或绝对数量。因此，这种仪器广泛应用于基因表达定量、病原检测及突变分析等领域。
总的来说，Roche LightCycler480 II荧光定量PCR仪通过其精确的温控系统、高效的荧光信号检测系统和强大的数据分析功能，使得实时PCR技术得到了广泛的应用，尤其在基因组学研究和分子生物学实验中具有重要的作用。
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