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检测认证人脉交流通讯录

PCR测定试剂盒

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      一、PCR测定试剂盒试剂准备  
      1.DNA模板  
      2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)  
      3.10×PCRBuffer  
      4.2mMdNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM  
      5.Taq酶  
      二、操作步骤  
      1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。  
      10×PCRbuffer5μl  
      dNTPmixl4μl  
      引物1(10pM)2μl  
      引物2(10PM)2μ  
      Taq酶(2U/μl)1μl  
      DNA模板(50ng-1μg/μl)1μl  
      加ddH2O至50μl  
      视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。  
      2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃40s→58℃30s→72℃60s,循环30-35次,后在72℃保温7min。  
      3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。  
      4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测  
      三、注意事项  
      1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。  
      2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。  
      3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。  
      原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。  
      更多访问:  
      http://www.ysribio.com/SonList-2153106.html  
      https://www.chem17.com/st447429/erlist_2153106.html


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