检测认证人脉交流通讯录
- PCR八连排 技术原理
Real-time PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩 增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。荧光定量PCR技术具有特异性强，有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点，做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定Ct值，从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数。做到了真正意义上的DNA定量。
技术流程
一、RNA的提取
二、DNase I消化样品RNA中的DNA
三、RNA琼脂糖凝胶电泳
四、RNA反转录为cDNA
Real-Time PCR弓物设计的要求
①Tm=55~65 °C
②GC=30~80%
③PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大，一般在80~300 bp之间都可。
④引物的退火温度要高，-般要在60 °C以上。
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