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食品肉毒杆菌检测 奶粉肉毒杆菌检测 肉毒杆菌检测机构
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对应法规:国内外相关标准
CNAS认可项目:是
- 肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的致病菌,在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力,它在繁殖过程中所分泌的肉毒毒素具有极强的毒性,是KCN毒性的一万倍。纯化结晶的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠,对人的致死剂量约0.1μg。它通过阻断人体神经接头,导致全身麻痹、瘫痪,严重时能引起人呼吸肌麻痹,导致无法呼吸,最终死亡。
目前报道新西兰恒天然奶粉大批量被肉毒梭菌污染,给人们身心健康造成了极大的危害,国家加大了对食品质量安全的排查力度,为此,科标生物检测中心现全面开展食品中肉毒梭菌检测服务,为食品安全检测贡献一份力量。
科标生物检测中心主要结合GB/T4789.12-2003食品中卫生微生物学检验 肉毒梭菌及内毒素检验和SN/T 2525-2010食品中肉毒梭菌的PCR检测方法对食品中肉毒杆菌进行检验。
将样品经增菌后划平板分离单菌落,挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤(TPGY)培养基培养,对培养物用DNA提取试剂盒抽提DNA,进行PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳检验PCR产物中是否含有肉毒梭菌的的特征条带,从而对食品中是否污染肉毒梭菌进行快速检测。
试验方法
1、样品的增菌培养
取庖肉培养基2管和TPGY培养基2管,煮沸10min~15min(为了排除溶解于培养基中的氧,切勿摇动),迅速冷却。每15ml培养基中接种1g~2g固体食品或1ml~2ml液体食品(缓慢地将接种物接入肉汤液面下)。将样品接种2管庖肉培养基(35±1℃下培养)和2管TPGY培养基(28±1℃下培养),均厌氧培养5天。观察培养物的浊度、产气、肉粒的消化和产生的气味。若有生长继续以下操作,若无生长,则继续培养10天。
2、培养物分离
取2ml培养液置于无菌试管中,加入等量无菌无水乙醇,混匀,放置1h。用接种环取2环经处理过的培养物接种到厌氧卵黄琼脂上,35±1℃下厌氧培养48h。挑取可疑菌落接种到TPGY培养基,35±1℃下厌氧培养24h。
3、DNA提取、扩增
取1.4mlTPGY培养物转移到离心管中,13000r/min离心2min,弃去上清液。沉淀加入500µl生理盐水,震荡重悬30s,13000r/min离心2min,弃去上清液。沉淀中直接加入50µlDNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000r/min离心3min,取上清液4µl进行PCR扩增。扩增的DNA跑琼脂糖凝胶电泳,电泳结果用凝胶成像系统记录。
结果判定
阴性对照和空白对照均未出现条带,阳性对照出现预期大小的扩增条带,待测样品出现预期大小的扩增条带则判定为PCR结果阳性,科标生物检测中心报告“检出某型(A,B,E,F)肉毒梭菌”。待测样品未出现预期大小的扩增条带则判定为PCR结果为阴性,科标生物检测中心报告“未检出某型(A,B,E,F)肉毒梭菌”。
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